FLAG tag Peptide (Synonyms: H-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-OH)

FLAG tag Peptide ist ein 8-Peptid (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-ASP-ASP-Lys), das eine intestinale Kinase-Beschränkungsstelle enthält. Das FLAG Tag Peptid-Fusionssystem wird in der Immunaffinitätschromatographie zur Proteinidentifikation und -reinigung verwendet. FLAG tag Peptide-Markierungspeptide ermöglichen die Elution unter nicht-denaturierenden Bedingungen[1,6]. Das FLAG tag Peptide kann entweder an das N- oder C-Terminus eines gegebenen Fusionsproteins fusioniert werden.

Das FLAG tag Peptide-Markierungspeptid-Fusionssystem umfasst eine einzigartige und weit verbreitete Technik zur Proteinidentifikation und -reinigung. Wenn es kovalent an einen festen Träger gebunden ist, kann der Anti-Flag M1 Antikörper für die schnelle Reinigung von FLAG tag Peptide-Fusionsproteinen in einem milden, calciumabhängigen Affinitätschromatographie-Verfahren verwendet werden. FLAG tag Peptide-Fusionsproteine werden typischerweise in einem einzigen Schritt zur Homogenität gereinigt, ausgehend von einem rohen Zellhomogenat oder Überstand, ohne dass das Protein jemals anderen Bedingungen als physiologischer Kochsalzlösung bei pH 7.2 (mit Calcium oder EDTA) ausgesetzt wird. Der gesamte Reinigungsprozess kann innerhalb weniger Stunden durchgeführt werden[2-3].

Das N-terminale FLAG tag Peptide-Fusionsprotein kann durch Agarose-Affinitätsgel gereinigt werden[5]. Ein verkürztes Proteinreinigungsverfahren, bei dem mechanische Zellzerstörung und Affinitätsreinigung durch Immobilisierung des Anti-Flag M1 Antikörpers auf magnetischen Glasperlen kombiniert werden. Die modifizierten Glasperlen wurden zu Hefezellen hinzugefügt und auf einem Labormischgerät gemischt. Die magnetischen Glasperlen fangen das Zielprotein ein, während die Hefezellen zerstört werden. Durch den Kontakt mit einem stationären Magneten können die magnetischen Glasperlen sehr effizient von Hefezelltrümmern getrennt werden. Chelatbildner wie EDTA waren in der Lage, die FLAG tag Peptide-Fusionsproteine von den magnetischen Glasperlen zu eluieren[4].

References:
[1]. Einhauer A, Jungbauer A. The FLAG peptide, a versatile fusion tag for the purification of recombinant proteins. J Biochem Biophys Methods. 2001 Oct 30;49(1-3):455-65. doi: 10.1016/s0165-022x(01)00213-5. PMID: 11694294.
[2]. Chiang CM, Roeder RG. Expression and purification of general transcription factors by FLAG epitope-tagging and peptide elution. Pept Res. 1993 Mar-Apr;6(2):62-4. PMID: 7683509.
[3]. Prickett KS, Amberg DC, Hopp TP. A calcium-dependent antibody for identification and purification of recombinant proteins. Biotechniques. 1989 Jun;7(6):580-9. PMID: 2698650.
[4]. Schuster M, Wasserbauer E, Ortner C, Graumann K, Jungbauer A, Hammerschmid F, Werner G. Short cut of protein purification by integration of cell-disrupture and affinity extraction. Bioseparation. 2000;9(2):59-67. doi: 10.1023/a:1008135913202. PMID: 10892539.
[5]. Hopp TP, Prickett KS, Price VL, et al. A Short Polypeptide Marker Sequence Useful for Recombinant Protein Identification and Purification. Bio/technology (Nature Publishing Company). 1988;6:1204-1210. DOI: 10.1038/nbt1088-1204.
[6].Li Y. Commonly used tag combinations for tandem affinity purification. Biotechnol Appl Biochem. 2010 Feb 15;55(2):73-83. doi: 10.1042/BA20090273. PMID: 20156193.