5-BrdU (Synonyms: BrdU, Bromodeoxyuridine, Broxuridine, NSC 38297) |
| Catalog No.GC11940 |
Le 5-BrdU (5-bromo-2'-désoxyuridine) est un analogue synthétique de la thymidine bromée, couramment utilisé pour mesurer la synthèse de l'ADN et marquer les cellules en division.
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Cas No.: 59-14-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Le 5-BrdU (5-bromo-2'-désoxyuridine) est un analogue synthétique de la thymidine bromée, couramment utilisé pour mesurer la synthèse de l'ADN et marquer les cellules en division [1]. Le 5-BrdU peut s'insérer sélectivement dans l'ADN cellulaire à la place de la thymidine pendant la phase S et être utilisé pour étudier les voies de signalisation et d'autres processus physiologiques qui induisent la prolifération cellulaire [2]. Le 5-BrdU peut être appliqué par culture cellulaire in vitro ou injection in vivo, puis détecté spécifiquement à l'aide d'anticorps anti-BrdU [3]. Après le marquage au 5-BrdU, une étape supplémentaire de dénaturation de l'ADN est nécessaire après la fixation et la perméabilisation des tissus ou des cellules pour permettre aux anticorps anti-5-BrdU de se lier au 5-BrdU incorporé dans l'ADN [4]. Les anticorps anti-5-BrdU peuvent être utilisés en combinaison avec d'autres marqueurs cellulaires, tels que Ki67, doublecortine (DCX) et NeuN, pour identifier les cellules proliférantes et les neurones nouvellement différenciés [5].
References:
[1] Zhu H. Cell proliferation assay by flow cytometry (BrdU and PI staining)[J]. Bio-protocol, 2012: e198-e198.
[2] Ziv Y, Ron N, Butovsky O, et al. Immune cells contribute to the maintenance of neurogenesis and spatial learning abilities in adulthood[J]. Nature neuroscience, 2006, 9(2): 268-275.
[3] Matiašová A, Ševc J, Mikeš J, et al. Flow cytometric determination of 5-bromo-2ʹ-deoxyuridine pharmacokinetics in blood serum after intraperitoneal administration to rats and mice[J]. Histochemistry and cell biology, 2014, 142: 703-712.
[4] Wolter S, Dittmar F, Seifert R. cCMP and cUMP in apoptosis: concepts and methods[J]. Non-canonical Cyclic Nucleotides, 2017: 25-47.
[5] Diaz F. Characterization of the Neurogenic Response to Apoptosis of Cortical Glutamatergic Neurons in the Adult Brain[M]. Yeshiva University, 2013.
Ce protocole ne fournit qu'une ligne directrice et doit être modifié en fonction de vos besoins spécifiques.
1. Préparation des solutions
(1) Solution stock : Dissoudre le 5-BrdU solide dans du DMSO ou de l'eau déionisée à une concentration finale de 10 mM et stériliser par filtration.
Remarque : Après avoir aliquoté la solution non utilisée, conservez-la dans un endroit sombre à -20 °C pour éviter les cycles répétés de congélation et décongélation.
(2) Solution de travail : Avant l'expérience formelle, diluer la solution stock avec un tampon expérimental jusqu'à la concentration de travail requise et stériliser par filtration.
Remarque : Veuillez ajuster la concentration de travail pour une application spécifique en fonction de la situation réelle ou consulter la littérature pour établir un gradient de concentration afin d'explorer les meilleures conditions. La solution de travail doit être préparée et utilisée immédiatement.
2. Marquage in vitro des cellules avec du 5-BrdU
(1) Peser 3 mg de 5-BrdU et les dissoudre dans 1 ml d'eau déionisée jusqu'à dissolution complète. Préparer une solution stock de BrdU à 10 mM. Diluer cette solution à une concentration de 10 μM avec le milieu de culture cellulaire dans un rapport de 1:1000 et stériliser la solution de marquage avec un filtre de 0,2 μm dans des conditions stériles.
(2) Aspirer le milieu de culture intracellulaire et remplacer par une solution de marquage BrdU stérile à 10 μM, puis incuber dans un incubateur à CO2 à 37 °C pendant 1 à 24 heures.
(3) Aspirer la solution de marquage intracellulaire et laver deux fois avec du PBS, chaque lavage durant au moins 5 secondes.
(4) Fixer et perméabiliser les cellules selon le protocole standard d'immunocytochimie (ICC). Cependant, avant de commencer l'immunomarquage, se référer aux étapes suivantes de dénaturation de l'ADN.
Remarque : Le temps d'incubation du 5-BrdU dépend du taux de division cellulaire. Les cellules primaires peuvent nécessiter jusqu'à 24 heures, tandis que les lignées cellulaires à prolifération rapide peuvent n'avoir besoin que d'une heure. Le temps nécessaire pour obtenir le meilleur rapport signal/bruit doit être déterminé par l'optimisation des conditions.
3. Marquage in vivo au 5-BrdU
Il existe plusieurs méthodes pour le marquage in vivo au 5-BrdU, la plus courante étant l'injection intrapéritonéale. Voici les étapes pour l'injection intrapéritonéale. D'autres méthodes peuvent être consultées dans la littérature ou mises en œuvre en fonction de l'expérience propre au laboratoire.
(1) Dissoudre une quantité appropriée de 5-BrdU dans du PBS 1x pour préparer une solution stock à 10 mg/ml, filtrer et stériliser, puis congeler en aliquotes à usage unique pour une utilisation ultérieure. Éviter les cycles répétés de congélation et décongélation.
(2) Pour les souris, la concentration d'injection couramment utilisée de 5-BrdU est de 100 mg/kg. Après le marquage, traiter les animaux selon les procédures établies du laboratoire.
Remarque : L'insertion du 5-BrdU dans les tissus à différenciation rapide, comme l'intestin grêle, peut être détectée 30 minutes après l'injection. Cependant, la détection dans la plupart des tissus peut nécessiter jusqu'à 24 heures. Le temps de traitement et la dose d'injection appropriés doivent être optimisés en fonction du type de tissu.
4. Étape de dénaturation de l'ADN
Échantillons cellulaires :
(1) Incuber les cellules avec de l'HCl à une concentration de 1 à 2,5 M à température ambiante pendant 10 minutes à 1 heure. La concentration exacte d'HCl et le temps d'incubation doivent être optimisés en fonction de l'expérience. Si un temps d'incubation plus court est utilisé, une incubation à 37°C peut être plus efficace qu'à température ambiante.
(2) Étape optionnelle : Retirer l'HCl et neutraliser avec un tampon de borate de sodium 0,1 M, pH 8,5 à température ambiante pendant 30 minutes.
(3) Laver trois fois avec du PBS, chaque lavage durant au moins 5 secondes. Poursuivre avec l'immunomarquage selon le protocole standard d'IHC.
Coupes de tissus :
(1) Déparaffiner d'abord les coupes de paraffine.
(2) Incuber les coupes avec de l'HCl à une concentration de 1 à 2,5 M à température ambiante pendant 30 minutes à 1 heure. La concentration exacte d'HCl et le temps d'incubation doivent être optimisés en fonction de l'expérience. Si un temps d'incubation plus court est utilisé, une incubation à 37°C peut être plus efficace qu'à température ambiante.
(3) Étape optionnelle : Retirer l'HCl et neutraliser les coupes avec un tampon de borate de sodium 0,1 M, pH 8,5 à température ambiante pendant 10 minutes.
(4) Laver trois fois avec du PBS, chaque lavage durant au moins 5 secondes. Poursuivre avec l'immunomarquage selon le protocole standard d'IHC.
Remarque : Le 5-BrdU est un mutagène. Prenez des précautions lors de la manipulation et évitez tout contact direct avec la peau. De plus, portez un masque pour éviter l'inhalation de poussières. Pour votre sécurité, portez une blouse de laboratoire et des gants jetables.
| Cas No. | 59-14-3 | SDF | |
| Synonymes | BrdU, Bromodeoxyuridine, Broxuridine, NSC 38297 | ||
| Chemical Name | 5-bromo-1-((2R,4S,5R)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-2-yl)pyrimidine-2,4(1H,3H)-dione | ||
| Canonical SMILES | BrC(C(N1)=O)=CN(C1=O)[C@@]2([H])C[C@@](O)([H])[C@@](O2)([H])CO | ||
| Formula | C9H11BrN2O5 | M.Wt | 307.1 |
| Solubility | ≥ 15.35mg/mL in DMSO, ≥ 16.23 mg/mL in Water with ultrasonic, ≥ 11.56 mg/mL in 0.9% NS with ultrasonic | Storage | 4°C, protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
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| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2563 mL | 16.2813 mL | 32.5627 mL |
| 5 mM | 0.6513 mL | 3.2563 mL | 6.5125 mL |
| 10 mM | 0.3256 mL | 1.6281 mL | 3.2563 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
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μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >99.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
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