Cardiogreen (Foxgreen) (Synonyms: Cardio Green, Ujoviridin)

Protocole pour l'essai d'absorption de Cardiogreen (Foxgreen) dans les cellules:

Cardiogreen (Foxgreen, indocyanine green) est un colorant biologique non toxique qui ne peut être absorbé que par les hépatocytes après injection intraveineuse, puis il est sécrété par les hépatocytes. Lorsqu'ils sont cultivés avec un milieu sans sérum, les hépatocytes absorbent Cardiogreen, et le cytoplasme apparaît en vert. Après restauration du sérum, Cardiogreen est sécrété hors du cytoplasme.

1. Ajouter Cardiogreen au milieu des hépatocytes sans sérum à une concentration finale de 1 mg/mL et cultiver les cellules avec ce milieu pendant 1 heure à 37℃.

2. Retirer le milieu sans sérum et laver les cellules avec du PBS trois fois.

3. Examiner et imager les cellules avec un microscope.

Protocole pour l'imagerie des voies urinaires chez les souris avec Cardiogreen liposomal [1]:

0-0,8 μM de Cardiogreen a été incubé avec 1 % de liposomes et 20 μM ou 200 μM de pyrene pour évaluer la polarité et la fluidité, respectivement. Les spectres de fluorescence ont été mesurés à l'aide d'un spectrophotomètre de fluorescence avec une longueur d'onde d'excitation de 335 nm.

Les souris ont été rasées sous anesthésie à l'isoflurane (1%-2 %, v/v) et ont subi des scans de base à l'aide d'un système d'imagerie in vivo. Deux cents microlitres de liposomes de Cardiogreen Phospholipon 50 à 8 mg/kg ou du composé libre dans un tampon de saccharose à 2 mM (tampon phosphate pH 7, avec 9,3 % de saccharose) ont été injectés dans la veine caudale et les souris ont été scannées de manière répétée pendant une période allant jusqu'à 120 min. Pour les études ex vivo, les animaux ont été traités comme décrit ci-dessus et sacrifiés sous anesthésie par dislocation cervicale, 10 min après l'injection. Le sang cardiaque a été collecté dans des plaques à 96 puits héparinisées et les tissus ont été prélevés. Pendant la procédure de collecte, les échantillons de tissus et de sang ont été protégés de la lumière et maintenus sur glace. Immédiatement après, le sang et les tissus ont été scannés à l'aide d'un imageur biomoléculaire.

Protocole pour les études de l'accumulation de Cardiogreen liposomal dans le système urinaire:

Le Cardiogreen liposomal ou libre (8 mg/kg) a été injecté dans la veine caudale, et 3 min plus tard, les souris ont été traitées avec une forte dose de pentobarbital administrée par voie intrapéritonéale. La durée totale de la circulation active après l'injection de Cardiogreen était d'environ 10 min. Par la suite, les souris ont subi une laparotomie médiane avec une exposition complète du rétro-péritoine. Les uretères ont été identifiés à leur origine des reins, et distaux clipsés ou attachés lâchement pour identification. Les souris ont également subi une hystérectomie pour faciliter l'identification de la vessie urinaire. Ensuite, les animaux ont été scannés avec un imageur biomoléculaire.

Ce protocole fournit uniquement une ligne directrice et doit être modifié en fonction de vos besoins spécifiques.

Référence:

[1]. Portnoy E, Nizri E, et al. Imaging the urinary pathways in mice by liposomal indocyanine green. Nanomedicine. 2015 Jul;11(5):1057-64. doi: 10.1016/j.nano.2015.02.019. Epub 2015 Mar 16. PMID: 25791809.