CFDA-SE (Synonyms: 5(6)Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester)

CFDA-SE, de son nom complet carboxycéine diacétate, succinimidyl ester, avec une perméabilité à la membrane cellulaire, est un colorant fluorescent couramment utilisé pour le marquage des cellules viables ou la détection de la prolifération cellulaire. La fluorescence des cellules marquées par le CFDA-SE est très homogène et stable, et peut être répartie de manière uniforme aux deux cellules filles. Le CFDA-SE émet une fluorescence verte intense, avec des valeurs d'excitation et d'émission respectivement de 494 nm et 521 nm.

Dans la lignée cellulaire humaine érythroleucémique K562 et d'autres lignées cellulaires, bien que toutes les cellules soient marquées avec une intensité de fluorescence relativement élevée par le CFDA-SE, l'efficacité de marquage reste très variable. À un niveau ultrastructural, des vésicules denses aux électrons sont observées dans les cellules marquées. Un marquage vésiculaire discret peut également être observé dans des cellules entières montées et visualisées en microscopie à fluorescence. Les cellules entières conservent un marquage de qualité pendant 6 semaines. Le marquage par CFDA-SE est relativement simple, non toxique pour les cellules et non radioactif.

L’analyse de la prolifération des lymphocytes in vitro par la méthode CFDA-SE est une option fiable et pratique pour évaluer les réponses mitogéniques des lymphocytes T chez les patients atteints de PID (immunodéficiences primaires) encore non classifiés, afin de cibler des analyses génétiques plus poussées. Lors de la détection de NM par cytométrie en flux, le canal de détection FL1 peut être utilisé pour observer les cellules marquées par le CFDA-SE. La microscopie à fluorescence peut également être employée pour observer les cellules marquées par le CFDA-SE sans coloration des cellules adjacentes.

Il a été rapporté que le CFDA-SE est efficace pour marquer les cellules CD34+. Les cellules CD34+, isolées à partir du foie fœtal ou du thymus, ont été marquées par le CFDA-SE et injectées dans un thymus humain greffé sous-cutanément chez des souris RAG-2 / IL-2Rγ /. Une à quatre semaines plus tard, le marqueur CFDA-SE a été retrouvé non seulement dans les cellules T mais aussi dans les cellules CD123+/high CD4+CD45RA+ pDC2, indiquant que les cellules CD34+ peuvent se différencier en pDC2 dans un thymus. En plus des pDC2, des cellules dendritiques marquées par le CFDA-SE avec un phénotype mature, déterminé par les marqueurs de surface CD11c, CD83 et CD80, ont été retrouvées dans le thymus greffé humain injecté. Les pDC2 n'ont pas été retrouvées dans la périphérie des souris porteuses de greffons thymiques humains, ce qui indique que les pDC2 intrathymiques n'ont pas migré hors du thymus.

Chez les souris C57BL/6, le CFDA-SE, à une concentration 80 fois plus élevée que celle utilisée pour le marquage in vitro, n'était pas toxique et a marqué environ 15 % des thymocytes de manière aléatoire 24 heures après injection. Le taux de renouvellement des émigrants thymiques marqués dans les ganglions lymphatiques était de l'ordre de 21 jours. Ainsi, le CFDA-SE peut constituer un outil puissant pour les études de migration à long terme.

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