Streptavidin-FITC

この計画はあくまでガイドラインですので、具体的なニーズに合わせて修正してください。

1. 溶液の調製

(1) ストック溶液：この製品は濃度0.5 mg/mlの溶液の形で提供されます。

注意：2-8°Cで保存し、光を避け、凍結と解凍の繰り返しを避けてください。

(2) 作業溶液：正式な実験の前に、PBSに10%の通常のヤギ血清を含む溶液で1:20から1:50の比率で希釈してください。

注意：特定のアプリケーションの作業濃度は実際の状況に応じて調整するか、文献を参照して自分で勾配濃度を設定し、最適な条件を得てください。作業溶液は準備してすぐに使用する必要があります。

2. ストレプトアビジン-FITCを使用してフローサイトメトリーで細胞表面レクチン結合を検出する手順[1]（文献からの引用、参考用）

(1) 細胞処理：細胞を96ウェルプレートに移し、各ウェルにビオチン化レクチン1µgを加え、1時間インキュベートします。

(2) 細胞洗浄：PBSで細胞を3回洗浄します。

(3) ラベリング：ストレプトアビジン-FITC作業溶液で30分間インキュベートします。

(4) 蛍光検出：FACSCaliburフローサイトメーターを使用して細胞のレクチン結合プロファイルを測定します。励起波長と発光波長はそれぞれ488 nmと520 nmに設定します。

3. ストレプトアビジン-FITCを使用して細胞をラベリングする手順[2]（文献からの引用、参考用）

(1) 細胞処理：PBSバッファーに1%パラホルムアルデヒドおよび0.1% Tritron X-100を含む溶液で細胞を4°Cで30分間インキュベートします。

(2) 細胞洗浄：PBSバッファーで細胞を2回洗浄します。

(3) ビオチン処理：細胞をビオチン化ペプチドで4°Cで1時間インキュベートします。

(4) ラベリング：ストレプトアビジン-FITC作業溶液（10 µg/ml）で細胞を4°Cで30分間インキュベートし、その後2回洗浄します（ステップ2を繰り返します）。

(5) PI処理：PBSバッファーに1µg/mlのプロピジウムヨウ化物（PI）を補充した溶液に細胞を浸し、25°Cで観察します。

(6) 蛍光検出：蛍光顕微鏡を使用して細胞を観察します。FITCチャネルに使用する励起波長と発光波長はそれぞれ488 nmと525 nmです。

注意：このプロトコルは、ストレプトアビジン-FITCを用いた細胞のラベリングおよびその後の蛍光測定のガイダンスを提供します。他の文献や特定の実験要件に基づいて調整を行ってください。

参考文献：

[1]Thomas M, Pierson M, Uprety T, et al. Comparison of porcine airway and intestinal epithelial cell lines for the susceptibility and expression of pattern recognition receptors upon influenza virus infection[J]. Viruses, 2018, 10(6): 312.
[2] Smith T E, Pond C D, Pierce E, et al. Accessing chemical diversity from the uncultivated symbionts of small marine animals[J]. Nature chemical biology, 2018, 14(2): 179-185.