CFDA-SE (Synonyms: 5(6)Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester)

CFDA-SE는 전명 카복시세린 디에세린, 스키니미딜 에스테르로 세포막 투과성을 가지고 있고 활성 세포 추적이나 세포 증식 탐지에 널리 사용되는 형광 염료이다. CFDA-SE로 표시된 세포의 형광는 매우 일관적이고 안정적이고 형광가 두 후손 세포에 골고루 분포할 수 있다[2]. CFDA-SE는 강한 녹색 형광을 발산할 수 있고 Ex=494 nm, Em=521nm를 가지고 있다.

인간 적혈구백혈병 세포 라인 K562 및 기타 세포계에서 모든 세포가 CFDA-SE에 의해 상대적으로 높은 형광강도로 표시되지만 표시 효율이 매우 변동적이다[3]. 표시된 세포의 초미세 구조 수준에서 전자 밀도가 높은 소포를 볼 수 있다. 형광 현미경으로 관찰하는 전체 세포 마운트에서도 이산 소포 표시를 관찰할 수 있다. 전체 세포는 6주간 좋은 표시를 유지할 수 있다. CFDA-SE 표시는 상대적으로 쉽고 세포에 독성이 없으며 무방사능이다[4].

CFDA-SE 방법으로 진행되는 체외 림프구 세포 증식 분석은 아직 분류되지 않은 기본 면역결핍증(PID) 환자의 미토제닌 T 림프구 반응을 평가하고 추가적인 유전학 분석을 목표로 하는 안정적이고 실용적인 선택이다[5]. 흐름 사이토메트리로 NM을 탐지할 때 FL1 탐지 채널 CFDA-SE로 표시된 세포를 채용할 수 있고 형광 현미경도 사용하여 CFDA-SE로 표시된 세포를 인근 세포를 염색하지 않고 관찰할 수 있다[6].

CFDA-SE는 CD34+ 세포를 표시하는 데 효과적이라고 보고되었다. 태아 간 또는 흉선에서 분리된 CD34+ 세포가 CFDA-SE로 표시되어 RAG-2 / IL-2Rγ / 쥐에 피하으로 이식된 인간 흉선에 주입되었다. 1주일에서 4주 후 CFDA-SE 표시는 T 세포뿐만 아니라 CD123+/high CD4+CD45RA+ pDC2에서도 발견되었고 이는 CD34+ 세포가 흉선 내에서 pDC2로 발육할 수 있음을 나타낸다. pDC2 외에도 표면 표지 CD11c, CD83, CD80에 의해 결정된 성숙한 표현을 가진 CFDA-SE 표시된 멜라노시트 세포가 주입된 인간 흉선 이식물에서 발견되었다. 인간 흉선 이식물을 가진 쥐의 주변에서는 pDC2가 발견되지 않았고 이는 흉선내의 pDC2가 흉선으로부터 이주하지 못했다는 것을 나타낸다[7]. C57BL/6 쥐에서 CFDA-SE는 체외 표시에 사용된 농도의 80배에 해당하는 농도로 독성이 없었으며 주입 후 24시간 후에 무작위로 약 15%의 췌세포를 표시했다. 표시된 흉선 이주세포의 림프절에서의 대변율은 약 21일에 해당한다. 게다가 CFDA-SE는 상대적으로 장기간의 이주 연구에서 강력한 도구가 될 수 있다[8].

References:
[1]: Chen JC, Chang ML, et,al. A kinetic study of the murine mixed lymphocyte reaction by 5,6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester labeling. J Immunol Methods. 2003 Aug;279(1-2):123-33. doi: 10.1016/s0022-1759(03)00236-9. PMID: 12969553.
[2]: Lyons AB, Blake SJ, et,al. Flow cytometric analysis of cell division by dilution of CFSE and related dyes. Curr Protoc Cytom. 2013;Chapter 9:Unit9.11. doi: 10.1002/0471142956.cy0911s64. PMID: 23546777.
[3]: Wang XQ, Duan XM, et,al. Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester fluorescent dye for cell labeling. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 2005 Jun;37(6):379-85. doi: 10.1111/j.1745-7270.2005.00051.x. PMID: 15944752.
[4]: Gruber HE, Leslie KP, et,al. Optimization of 5-(and-6)-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester for labeling human intervertebral disc cells in vitro. Biotech Histochem. 2000 May;75(3):118-23. doi: 10.3109/10520290009066489. PMID: 10950173.
[5]: Azarsiz E, Karaca N, et,al. In vitro T lymphocyte proliferation by carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester method is helpful in diagnosing and managing primary immunodeficiencies. J Clin Lab Anal. 2018 Jan;32(1):e22216. doi: 10.1002/jcla.22216. Epub 2017 Apr 6. PMID: 28383134; PMCID: PMC6816938.
[6]: Li X, Dancausse H, et,al. Labeling Schwann cells with CFSE-an in vitro and in vivo study. J Neurosci Methods. 2003 May 30;125(1-2):83-91. doi: 10.1016/s0165-0270(03)00044-x. PMID: 12763234.
[7]: Weijer K, Uittenbogaart CH, et,al. Intrathymic and extrathymic development of human plasmacytoid dendritic cell precursors in vivo. Blood. 2002 Apr 15;99(8):2752-9. doi: 10.1182/blood.v99.8.2752. PMID: 11929763.
[8]: Graziano M, St-Pierre Y, et,al. The fate of thymocytes labeled in vivo with CFSE. Exp Cell Res. 1998 Apr 10;240(1):75-85. doi: 10.1006/excr.1997.3900. PMID: 9570923.