N-methyl Mesoporphyrin IX

이 계획은 가이드만을 제공하며 구체적인 요구에 따라 수정해야 합니다.

1.용액 준비

(1) 저장 용액: DMSO를 사용하여 N-methyl Mesoporphyrin IX를 녹이고 최종 농도는 5-10mg/mL이며 보관 용액 농도는 실제 필요에 따라 조정할 수 있습니다.

참고: 사용하지 않은 저장 용액은 분사 후 -20°C의 어두운 곳에 보관하여 반복적인 냉동 및 녹여내기를 피해야 합니다.

(2) 작업 용액: 실험 버퍼로 저장 용액을 희석하여 필요한 작업 농도로 만듭니다.

참고: 실제 상황에 따라 최적의 작업 농도를 조정하거나 문헌을 참조하여 스스로 그래디언트 농도를 설정해야 합니다. 작업 용액은 반드시 솔루션을 준비하여 즉시 사용해야 합니다. DMSO 함량은 천분의 일(1‰) 이하여야 합니다.

2.N-methyl Mesoporphyrin IX를 사용하여 젤에서 G-사중덩어리에 염색하기 위한 실험 단계[1]（문헌에서, 참고용）

(1) 20 μL 50 mM KCl에서 200 pmol의 표식되지 않은 올리고노클레오티드를 폴딩합니다. 폴딩된 올리고노클레오티드를 20 μL 로딩 버퍼와 혼합합니다. 혼합 샘플의 20 μL를 5% 기연유를 함유한 12% 폴리아크릴아미드 젤에 로드합니다.

(2) 전기영동을 수행하고 전기영동 후에 젤을 제거하여 염색을 진행합니다.

(3) N-methyl Mesoporphyrin IX 저장 용액 (5 mg/mL)을 준비하고 0.2 M HCl에서 녹입니다.

(4) N-methyl Mesoporphyrin IX 작업 용액 (1 μg/mL)을 준비하고 20 mM Tris (pH 7.6), 100 mM KCl, 1 mM EDTA에서 희석합니다. 젤을 작업 용액에 담가 20분 동안 흡착시킵니다.

(5) 형광이미지 분석기를 사용하여 532 nm의 파장에서 젤을 스캔합니다.

3.N-methyl Mesoporphyrin IX를 사용하여 Aβ40 측정하기 위한 실험 단계[2]（문헌에서, 참고용）

(1) 외처 유도체로서: 녹인 Aβ40 용액에 1 μM 농도로 N-methyl Mesoporphyrin IX를 추가합니다.

(2) 내처 억제제로서: 37°C에서 N-methyl Mesoporphyrin IX（10 μM）를 Aβ40（50 μM）와 함께 7일 동안 흡착시켰습니다. 형광측정 전에 추가적인 N-methyl Mesoporphyrin IX를 추가하여 농도를 1 μM로 유지합니다.

(3) 399 nm의 자외선 파장에서 형광 이미지 분석기를 사용하여 N-methyl Mesoporphyrin IX의 550에서 700 nm 범위의 스펙트럼 데이터를 수집합니다.

참조 문헌:

[1]Koralewska N, Szczepanska A, Ciechanowska K, et al. RNA and DNA G-quadruplexes bind to human dicer and inhibit its activity[J]. Cellular and Molecular Life Sciences, 2021, 78(7): 3709-3724.

[2] Li M, Zhao A, Ren J, et al. N-Methyl mesoporphyrin IX as an effective probe for monitoring Alzheimer’s disease β-amyloid aggregation in living cells[J]. ACS Chemical Neuroscience, 2017, 8(6): 1299-1304.