DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate) (Synonyms: 4-Amino-5-methylamino-2',7'-difluorofluorescein diacetate, DAF-FM DA) |
| Catalog No.GC33465 |
DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate) es una sonda fluorescente permeable a las células que se utiliza para la detección y bioimagen del óxido nítrico (NO). La sonda DAF-FM DA (Diaminofluoresceína-FM diacetato) puede cuantificar el nivel de óxido nítrico (NO) en las células, con una longitud de onda máxima de excitación/emisión de 495/515nm.
Products are for research use only. Not for human use. We do not sell to patients.
Cas No.: 254109-22-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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DAF-FM DA (Diaminofluorescein-FM diacetate) es una sonda fluorescente permeable a las células que se utiliza para la detección y bioimagen del óxido nítrico (NO). La sonda DAF-FM DA (Diaminofluoresceína-FM diacetato) puede cuantificar el nivel de óxido nítrico (NO) en las células, con una longitud de onda máxima de excitación/emisión de 495/515nm[1-2].
DAF-FM DA (Diaminofluoresceína-FM diacetato) puede permear la membrana celular de células vivas y es desacetilado por esterasa intracelular para convertirse en DAF-FM. El DAF-FM puede reaccionar con el NO producido en las células para formar triazol fluoresceína altamente fluorescente (DAF-FMT), el cual puede ser localizado y monitoreado por microscopía de fluorescencia o confocal, o detectado mediante ensayos de fluorescencia y citometría de flujo. El límite de detección de NO de DAF-FM DA (Diaminofluoresceína-FM diacetato) es de aproximadamente 3nM[1-3]. DAF-FM DA (Diaminofluoresceína-FM diacetato) puede ser utilizado como un tinte vital para embriones de pez cebra para marcar los centros de osificación temprana en el desarrollo del pez cebra[4]. DAF-FM DA (Diaminofluoresceína-FM diacetato) también se puede utilizar para detectar la producción de NO en hongos[5].
References:
[1] Kojima, H., Urano, Y., Kikuchi, K., et al.Fluorescent indicators for imaging nitric oxide productionAngew. Chem. Int. Ed. Engl.38(21)3209-3212(1999)
[2] Kojima, H., Nakatsubo, N., Kikuchi, J., et al.Detection and imaging of nitric oxide with novel fluorescent indicators: DiaminofluoresceinsAnal. Chem.70(13)2446-2453(1998)
[3] Kumari A, Bhatoee M, Singh P, et al. Detection of nitric oxide from chickpea using DAF fluorescence and chemiluminescence methods[J]. Current Protocols, 2022, 2(4): e420.
[4] Huysseune A, Larsen U G, Larionova D, et al. Bone formation in zebrafish: the significance of DAF-FM DA staining for nitric oxide detection[J]. Biomolecules, 2023, 13(12): 1780.
[5] Oiki S, Nasuno R, Urayama S, et al. Intracellular production of reactive oxygen species and a DAF-FM-related compound in Aspergillus fumigatus in response to antifungal agent exposure[J]. Scientific Reports, 2022, 12(1): 13516.
Este protocolo es solo una guía. Por favor, modifíquelo de acuerdo a sus necesidades específicas.
1. Preparación de la solución de tinción
(1) Preparar la solución de almacenamiento: Descongele el producto congelado a temperatura ambiente y concentre el polvo en el fondo mediante una breve centrifugación. Disuelva DAF-FM DA (Diaminofluoresceína-FM diacetato) en DMSO anhidro para preparar una solución de almacenamiento con una concentración de 1-10mM.
Nota: Después de alicuotar la solución de almacenamiento no utilizada, almacénela en la oscuridad a -20°C o -80°C para evitar congelaciones y descongelaciones repetidas.
(2) Diluya la solución de almacenamiento con un tampón adecuado (por ejemplo, medio de cultivo libre de suero y sin rojo fenol o PBS) para preparar una solución de trabajo con una concentración de 1-10μM.
Nota:
① Ajuste la concentración de la solución de trabajo de acuerdo con la situación real y prepárela antes de usarla.
② El rojo fenol interferirá con la señal fluorescente generada por el tinte. Use un medio de cultivo sin rojo fenol para preparar la solución de trabajo del tinte.
2. Tinción de suspensión celular (por ejemplo, placa de seis pocillos)
(1) Células en suspensión: Centrifugue a 4°C, 1000g durante 3-5 minutos, descarte el sobrenadante y lave dos veces con PBS durante 5 minutos cada vez.
(2) Células adherentes: Lave dos veces con PBS, añada tripsina para digerir las células y centrifugue a 1000g durante 3-5 minutos después de la digestión.
(3) Añada la solución de trabajo de DAF-FM DA (Diaminofluoresceína-FM diacetato) para resuspender las células e incube a 37°C en la oscuridad durante 0.5-1h. El tiempo de incubación óptimo varía según el tipo de células. Explore según las necesidades experimentales específicas.
(4) Después de la incubación, centrifugue a 1000g durante 5 minutos, elimine el sobrenadante y lave 2-3 veces con PBS, cada vez durante 5 minutos.
(5) Resuspenda las células en medio de cultivo celular sin suero precalentado o en PBS y observe con microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
3. Tinción de células adherentes
(1) Cultive células adherentes en cubreobjetos estériles.
(2) Retire el cubreobjetos del medio de cultivo, aspire el exceso de medio y coloque el cubreobjetos en un ambiente húmedo.
(3) Añada 100μL de la solución de trabajo de tinte desde una esquina del cubreobjetos y agite suavemente para cubrir uniformemente todas las células con el tinte.
(4) Incube a 37°C en la oscuridad durante 0.5-1h. El tiempo de incubación óptimo varía según el tipo de células. Explore según las necesidades experimentales específicas.
(5) Después de la incubación, aspire la solución de trabajo del tinte y lave el cubreobjetos 2-3 veces con medio de cultivo precalentado.
4. Detección microscópica: La longitud de onda máxima de excitación/emisión de DAF-FM DA (Diaminofluoresceína-FM diacetato) es 495/515nm.
Nota:
1) Todos los tintes fluorescentes tienen problemas de extinción. Trate de evitar la luz para retrasar el apagado de la fluorescencia.
2) Para su seguridad y salud, use una bata de laboratorio y guantes desechables al operar.
Referencias:
[1] Chris D St Laurent, Tae Chul Moon, A Dean Befus. Medición de óxido nítrico en mastocitos con el indicador fluorescente DAF-FM diacetato. 2015:1220:339-45. doi: 10.1007/978-1-4939-1568-2_21.
| Cas No. | 254109-22-3 | SDF | |
| Sinónimos | 4-Amino-5-methylamino-2',7'-difluorofluorescein diacetate, DAF-FM DA | ||
| Canonical SMILES | O=C1OC2(C3=C(OC4=C2C=C(F)C(OC(C)=O)=C4)C=C(OC(C)=O)C(F)=C3)C5=C1C(N)=C(NC)C=C5 | ||
| Formula | C25H18F2N2O7 | M.Wt | 496.42 |
| Solubility | Soluble in DMSO | Storage | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | Please select the appropriate solvent to prepare the stock solution according to the
solubility of the product in different solvents; once the solution is prepared, please store it in
separate packages to avoid product failure caused by repeated freezing and thawing.Storage method
and period of the stock solution: When stored at -80°C, please use it within 6 months; when stored
at -20°C, please use it within 1 month. To increase solubility, heat the tube to 37°C and then oscillate in an ultrasonic bath for some time. |
||
| Shipping Condition | Evaluation sample solution: shipped with blue ice. All other sizes available: with RT, or with Blue Ice upon request. | ||
| Prepare stock solution | |||
|
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.0144 mL | 10.0721 mL | 20.1442 mL |
| 5 mM | 0.4029 mL | 2.0144 mL | 4.0288 mL |
| 10 mM | 0.2014 mL | 1.0072 mL | 2.0144 mL |
Step 1: Enter information below (Recommended: An additional animal making an allowance for loss during the experiment)
g
μL
Step 2: Enter the in vivo formulation (This is only the calculator, not formulation. Please contact us first if there is no in vivo formulation at the solubility Section.)
Calculation results:
Working concentration: mg/ml;
Method for preparing DMSO master liquid: mg drug pre-dissolved in μL DMSO ( Master liquid concentration mg/mL, Please contact us first if the concentration exceeds the DMSO solubility of the batch of drug. )
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next addμL PEG300, mix and clarify, next addμL Tween 80, mix and clarify, next add μL ddH2O, mix and clarify.
Method for preparing in vivo formulation: Take μL DMSO master liquid, next add μL Corn oil, mix and clarify.
Note: 1. Please make sure the liquid is clear before adding the next solvent.
2. Be sure to add the solvent(s) in order. You must ensure that the solution obtained, in the previous addition, is a clear solution before proceeding to add the next solvent. Physical methods such as vortex, ultrasound or hot water bath can be used to aid dissolving.
3. All of the above co-solvents are available for purchase on the GlpBio website.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
Average Rating: 5 (Based on Reviews and 2 reference(s) in Google Scholar.)
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